تبلیغات

از درج هرگونه تبلیغات و مطالب هرز معذوریم

دانلود آهنگ بردیا صابری عیدی امسال

دانلود آهنگ جدید بردیا صابری عیدی امسال

و اینک ♫ دانلود آهنگ زیبای عیدی امسال از بردیا صابری به همراه تکست و بهترین کیفیت از رسانه هات موزیک ♫

شعر و ملودی : بردیا صابری | تنظیم قطعه : آرش خاتمی

Download New Music BY : Bardia Saberi | Eydiye Emsal With Text And 2 Quality 320 And 128 On Hot-Music

Bardia Saberi Eydiye Emsal دانلود آهنگ بردیا صابری عیدی امسال

متن آهنگ عیدی امسال بردیا صابری

───┤ ♩♬♫♪♭ ├───

1 copy 300x21 دانلود آهنگ بردیا صابری عیدی امسال

───┤ ♩♬♫♪♭ ├───

دانلود آهنگ بردیا صابری عیدی امسال

نوشته دانلود آهنگ بردیا صابری عیدی امسال اولین بار در هات موزیک ~ دانلود آهنگ ها پدیدار شد.

ادامه‌ی پست

دانلود آهنگ فریدون آسرایی اتفاقی نیست

دانلود آهنگ جدید فریدون آسرایی اتفاقی نیست

کاربران عزیز رسانه هات موزیک دانلود کنید و لذت ببرید ♫ آهنگ زیبا و شنیدنی اتفاقی نیست از فریدون آسرایی به همراه تکست و بهترین کیفیت ♫

ملودی : صادق زینی وند | تنظیم قطعه : امین قاسمی

Download New Music BY : Fereydoun Asraei | Etefaghi Nist With Text And 2 Quality 320 And 128 On Hot-Music

Fereydoun Asraei Etefaghi Nist دانلود آهنگ فریدون آسرایی اتفاقی نیست

متن آهنگ اتفاقی نیست فریدون آسرایی

───┤ ♩♬♫♪♭ ├───
رومو زمین ننداز آینده ی من به این رابطه بنده●♪♫
رومو زمین ننداز دنیا رو احساسم شرط میبنده●♪♫
رو کن به این احساس خواب و خیال من از عشق لبریزه●♪♫
ثابت شده واسم چشمای تو یعنی یه کوه انگیزه●♪♫
عکساتو میبوسم هوش از سرم میره این اتفاقی نیست●♪♫
بی تو تموم شب دلگیره دلگیره این اتفاقی نیست●♪♫
عکساتو میبوسم هوش از سرم میره این اتفاقی نیست●♪♫
بی تو تموم شب دلگیره دلگیره این اتفاقی نیست●♪♫

ملودی : صادق زینی وند

1 copy 300x21 دانلود آهنگ فریدون آسرایی اتفاقی نیست

تنظیم قطعه : امین قاسمی

باید علاقم رو ثابت کنم تا باز عشق تو برگرده●♪♫
رومو زمین ننداز کابوس بی وقفه تنهاترم کرده●♪♫
چی شد که این روزا بین من و دستات فاصله افتاده●♪♫
رومو زمین ننداز بغضای بعد از تو منو شکست داده●♪♫
عکساتو میبوسم هوش از سرم میره این اتفاقی نیست●♪♫
بی تو تموم شب دلگیره دلگیره این اتفاقی نیست●♪♫
عکساتو میبوسم هوش از سرم میره این اتفاقی نیست●♪♫
بی تو تموم شب دلگیره دلگیره این اتفاقی نیست●♪♫

───┤ ♩♬♫♪♭ ├───

دانلود آهنگ فریدون آسرایی اتفاقی نیست

نوشته دانلود آهنگ فریدون آسرایی اتفاقی نیست اولین بار در هات موزیک ~ دانلود آهنگ ها پدیدار شد.

ادامه‌ی پست

۳cx

سلام
میشه بفرمایید تجهیزات و پیش نیاز های مورد نیاز برای ایجاد و راه اندازی ویپ بر اساس ۳cx چیست؟

ادامه‌ی پست

دانلود آهنگ کامران مولایی بی خیالش

دانلود آهنگ جدید کامران مولایی بی خیالش

هم اکنون دانلود کنید ♫ آهنگ جدید و زیبای بی خیالش از کامران مولایی به همراه تکست و بهترین کیفیت از رسانه هات موزیک ♫

شعر و ملودی : حسن اطاعتی | تنظیم قطعه : باربد زارع

Download New Music BY : Kamran Molaei | Bikhiyalesh To With Text And 2 Quality 320 And 128 On Hot-Music

Kamran Molaei Bikhiyalesh دانلود آهنگ کامران مولایی بی خیالش

متن آهنگ بی خیالش کامران مولایی

───┤ ♩♬♫♪♭ ├───
بی قراری نکن بسه دیگه اونکه رفته دیگه برنگرده بیخیالش هر چی بوده هرکاری که با قلب تو کرده ●♪♫
بیخیالش اگه از تو رد شد خوب بودی ولی با تو بد شد●♪♫
پشت سرت حرف زد پیش هر کی بی وفا بودنو خوب بلد شد●♪♫
بیخیالش بذار هر چی زودتر بره رد کارش به من قول بده نشی بی قرارش بیخیالش●♪♫
خوب میدونم واست سخته دلواپس اون نباشی واست سخته راحت بتونی جداشی ولی بی خیالش بی خیالش●♪♫
بیخیالش بذار هر چی زودتر بره رد کارش به من قول بده نشی بی قرارش بیخیالش●♪♫
خوب میدونم واست سخته دلواپس اون نباشی واست سخته راحت بتونی جداشی ولی بی خیالش بی خیالش●♪♫

شعر و ملودی : حسن اطاعتی

1 copy 300x21 دانلود آهنگ کامران مولایی بی خیالش

تنظیم قطعه : باربد زارع

با یکی بودی که حتی یه ثانیه ام اون به فکرت نبودش عشق آتیشیو گرمی و میسوزی و میوفتی تو دودش●♪♫
حال امروزتم پای دیروزته پس بیا منطقی باش با خودت وعده کن عاشق آدمی باشی تا هی نگی کاش●♪♫
سهمت از این همه بی قراری تنها یه قلب بی اعتماده از تو چی موند غیر اینکه شدی یه آدم بی اراده●♪♫
بیخیالش بذار هر چی زودتر بره رد کارش به من قول بده نشی بی قرارش بیخیالش●♪♫
خوب میدونم واست سخته دلواپس اون نباشی واست سخته راحت بتونی جداشی ولی بی خیالش بی خیالش●♪♫
بیخیالش بذار هر چی زودتر بره رد کارش به من قول بده نشی بی قرارش بیخیالش●♪♫
خوب میدونم واست سخته دلواپس اون نباشی واست سخته راحت بتونی جداشی ولی بی خیالش بی خیالش●♪♫

───┤ ♩♬♫♪♭ ├───

دانلود آهنگ کامران مولایی بی خیالش

نوشته دانلود آهنگ کامران مولایی بی خیالش اولین بار در هات موزیک ~ دانلود آهنگ ها پدیدار شد.

ادامه‌ی پست

مجله آموزشی متحد | افزونه اشتراک طلایی Restrict Content Pro آپدیت شده

افزونه اشتراک ویژه Restrict Content Pro


تاریخ ارسال : ۲۴ / بهمن / ۱۳۹۶   بازدید : ۱۲۵   نویسنده : آرمان خوش رو


 افزونه اشتراک طلایی Restrict Content Pro | افزونه VIP وردپرس | Restrict Content Pro

همان طور که میدانید(اگر نمیدانستید حال بدانید) وردپرس تقریبا سیستم مدیریت محتوایی کاملی و قدرتمندی است که میتواند در هر زمینه ای به کار گرفته شود، اگر از کاربرانی هستید که برایتان سوال پیش آمده وبسایت های تولید محتوا یا ارائه فایل که از طریق عضویت چگونه کسب درآمد میکنند عزیزان با ما در این لحظه باشید.

آیا تا به حال از خودت پرسیده اید سیستم عضویت پیشرفته VIP چیست؟

سیستم(های)عضویت یا VIP که مخفف عبارت Very Important Person هستند، یک چرخه کاملی از تعامل فروشنده با مشتریان است. در این سیستم کاربران و مخاطبین در ازای پرداخت هزینه های مختلف با دوره های زمانی متفاوت، میتوانند از خدمات وبسایت استفاده کنند.

بهترین و قدرتمند ترین افزونه مدیریت کاربران ویژه(VIP) وردپرس چیست؟؟

افزونه اشتراک طلایی Restrict Content Pro یا مشترک طلایی به شما این امکان را میدهد سایتی با کیفیت بالا داشته و به معنای واقعی بر روی کاربران خود مدیریت داشته باشید . افزونه ای که با امکانات زیر در اختیار کاربران وردپرسی قرار می دهیم، افزونه اشتراک طلایی (VIP)حرفه ای می باشد . کارکرد این افزونه به این صورت است که شما از تنظیمات افزونه یک سری سطوح با بازه های زمانی با هزینه و تاریخ استفاده معین تعریف می کنید ( مثلا عضویت ویژه ماهانه، با هزینه ۵۰ هزار تومان و مدت اعتبار ۳۱ روز) حال می توانید محتوایی تعریف کنید که فقط کاربرانی که دارای عضویت ویژه هستند قادر به استفاده از این محتوا باشند.

توجه: ستاره های که شما به سایت ما میدهید قوت قلبی هست برای ما جهت ارائه بیشتر محصولات اورجینال و در عین حال ارزان.

افزونه اشتراک طلایی Restrict Content Pro

  • ✔️دسترسی به فایل محصول به صورت مادام‌ العمر
  • ✔️پشتیبانی کاملا رایگان
  • ✔️تخفیف های ویژه برای خرید های دیگر شما 
  • امکانات افزونه اشتراک طلایی Restrict Content Pro
    • محیط ساده و روان
    • محیط کاملا فارسی و نسخه کاملا اورجینال(Restrict Content Pro)
    • ارزان و حجم کم  افزونه اشتراک طلایی Restrict Content Pro
    • تاریخ دلخواه برای سطوح اشتراک در نظر بگیرید تا با پایان تاریخ کاربر اشتراک خود را با پرداخت هزینه تمدید کند
    • براحتی برای هر سطح اشتراکی که ایجاد میکنید میتوانید قیمت دلخواه و متفاوتی نسبت به سایر سطح اشتراک درج کنید
    • کد های تخفیفی برای مشتریان خود در نظر بگیرید و در تمدید اشتراک های بعدی تخفیف درصدی اعمال کنید
    • ایمیل های ارسالی از طرف سایت به مدیریت یا کاربران را با متن دلخواه سفارشی کنید تا در موارد لازم بصورت خودکار ارسال شوند (مانند : ارسال ایمیل به کاربر قبل از اتمام سطح اشتراک)
    • درگاه پرداخت واسط خود را با ارز تومان یا ریال فعال کنید و برای دریافت هزینه سطوح اشتراک اقدام کنید
    • با فعال سازی افزونه های جانبی افزونه اشتراک طلایی را توسعه بدید و از امکانات افزونه براحتی استفاده کنید( افزونه اشتراک طلایی Restrict Content Pro توسعه پذیر می باشد)
    • تراکنش های پرداختی را میتوانید جهت پیگیری های آینده با سریال های پرداخت کد شده مدیریت کنید
    • برگه های ورود و خروج سایت را میتوانید با سایر افزونه ها ترکیب کنید
    • کلیه امور بصورت خودکار انجام خواهد شد (ارتقاء کاربر بعد از پرداخت حق اشتراک ، تمدید تاریخ اشتراک ، تعدید کاربر ویژه به عادی بعد از تاریخ انقضاء و غیره)
    • تعریف بی نهایت بازه زمانی و قابلیت تغییر ترتیب بندی بازه های زمانی برای هر سطح
    • قابلیت تعریف بینهایت نوع اشتراک (طلایی – ویژه – نقره ای – برنزی و غیره)
    • قابلیت تعریف تاریخ و قیمت برای هر سطح اشتراک
    • برونبری کاربران برای استفاده در سایر سیستم های مجهز به این افزونه
    • قابلیت ویرایش پیام های عمومی برای نمایش به کاربران عادی جهت ارتقاء اکانت و اشتراک
    • توانایی درج بینهایت کد تخفیف با قابلیت مدیریت تعداد استفاده و تاریخ انقضاء اعتبار کد تخفیف
    • نمایش کد های تخفیف استفاده شده و گزارش تعداد باقی مانده از هر کد تخفیف
    • هماهنگ با افزونه های فروشگاه ساز و EDD (افزونه جانبی)
    • قابلیت نمایش متن دلخواه به کاربرانی که عضویت ویژه ندارند
    • پشتیبانی از درگاه های پرداخت ایرانی واسط
    • قابلیت تعریف دستی کاربر ویژه با قابلیت تعریف مدت زمان اعتبار کاربر به روز
    • تعریف قالب دلخواه برای ایمیل های شروع عضویت
    • این افزونه با کلیه نسخه های وردپرس سازگار می باشد
    • و …

 

بیشتر بخوانید: افزونه پیشرفته نظرسنجی و راَی گیری Total Poll Pro ….

تمامی این امکانات فقط و فقط در نسخه اورجینال این محصول اضافه میشود و شما میتوانید از تخفیف %۵۰ این محصول نهایت استفاده را ببرید.

ادامه‌ی پست

حذف کوکی

سلام
یک کوکی تعریف کرده ام حال چگونه می توانم کوکی مورد نظر را در Layout حذف کنم
باتشکر

ادامه‌ی پست

مجله آموزشی متحد | افزونه Yoast Seo Premium ورژن۶٫۳ نسخه اورجینال آپدیت شده فول حرفه ای

افزونه Yoast Seo Premium اورجینال


تاریخ ارسال : ۲۶ / بهمن / ۱۳۹۶   بازدید : ۱۰۵   نویسنده : ژاله محبیان


افزونه Yoast Seo Premium |Yoast Seo|Yoast| Yoast Seo Premium

همان طور که میدانید وردپرس یکی از بهترین و قدرتمندترین سیستم مدیریت محتوا میباشد و مهم ترین مسئله آن مربوط به معروف شدن سایت یا معرفی دقیق و بهینه سازی این سیتم و محتوای آن به موتور های جستجوی قوی مثل گوگل ، بینگ ، یاهو و… می باشد که یکی از بهترین و ساده ترین راهکارهای افزایش بازدیدکنندگان سایت، بهینه سازی سئوی سایت و افزایش رنک (امتیاز) سایت در گوگل و دیگر موتور های جستجو است.

متخصصان سئو(افزونه Yoast Seo Premium) راه حل های متعددی را برای بهینه سازی سئوی سایت و معرفی آن به موتور های جستجو براسال الگوریتم آن ها انجام می دهند اما همانطور که می دانید انجام کار توسط این متخصصان نیازمند صرف هزینه های بسیار زیاد است در صورتی که شما با داشتن یک سایت وردپرسی به راحتی می توانید سئوی سایت خود را افزایش دهید و بهترین جایگاه گوگل در صفحه اول را به خود اختصاص دهید.
و از آن جای که سسیستم مدیریت محتوای وردپرس یکی از بهترین سیستم های مدیریت محتوا برای گوگل به شمار می رود و قالب های وردپرس نیز به صورت کاملا استاندارد و مطابق با اصول سئو طراحی می شوند. در این شرایط شما بخش اعظمی از کارهایی که متخصص سئو انجام می دهد را انجام داده اید و تنها مرحله باقیمانده برای افزایش سئوی سایت وردپرسی شما، تولید محتوای مناسب با کلمات کلیدی مناسب جهت ثبت در موتورهای جستجوگر از جمله گوگل می باشد.

Yoast نام یک افزونه تجاری و کاملا کاربردی در زمینه بهینه سازی حرفه ای(Yoast Seo) سایت شما می باشد.

بیشر بخوانید: افزونه اشتراک ویژه Restrict Content Pro با تخفیف فوق العاده ….

افزونه سئو(Yoast Seo) وردپرس یواست و یا همان افزونه Yoast Seo Premium یک افزونه سئو وردپرس حرفه ای هست که بدون شک می توان با افتخار اعلام کرد yoast seo مشهور ترین و پر مخاطب ترین افزونه سئو وردپرس در بین تمامی افزونه های موجود در دنیاست. افزونه سئوی yoast یا بهتر گفت yoast seo wordpress از آن دسته افزونه هایی هست که بلافاصله بعد از نصب وردپرس بایستی آنرا نصب کنید تا سئوی سایت شما ارتقا یابد. بدون نصب افزونه های سئو(افزونه Yoast Seo Premium) سایت شما هیچوقت به آن ورودی گوگل دلخواه شما نخواهد رسید. چون بدون نصب این افزونه ها متا تگ های مورد نیاز سئو(seo) در سایت شما پیدا نخواهد شد.

  • ✔️ دسترسی به فایل محصول به صورت مادام العمر(درصورت موجود)
  • ✔️ پشتیبانی کاملا رایگان
  • ✔️ تخفیف های ویژه برای خرید های دیگر شما

Yoast Premium SEO Plugin

افزونه Yoast Seo دارای دو نسخه رایگان و پرمیوم هست، اما نسخه رایگان و نسخه حرفه ای افزونه سئو وردپرس تفاوت هایی با یکدیگر دارد.

برخی دیگر از ویژگی های افزونه سئوی وردپرس Yoast
افزونه سئوی وردپرس yoast seo wordpress پرمیوم با نام تجاری Yoast Seo Premium بهترین، معروف ترین و قدرتمندترین افزونه وردپرس برای بهبود سئوی سایت شما همچون یک متخصص است که به شما کمک می کند تا خطاهایی که در کاهش امتیاز سئو موثر هستند را به هیچ وجه انجام ندهید. همچنین به کمک افزونه پرمیوم Yoast می توانید بهترین کلمات کلیدی را برای محتوای سایت خود در نظر بگیرید و با رعایت اصول سئو در بخش عنوان، خلاصه، تعداد کلمات، لینک مطلب، استفاده از هدینگ ها و … چندین برابر سئوی سایت خود را افزایش داده و در لیست نتایج اول گوگل و یا دیگر موتور های جستجو قرار بگیرید.

 

  • تفاوت نسخه رایگان Yoast Seo و نسخه پرمیوم چیست؟
    • قابلیت قرار دادن بیش از یک کلمه کلیدی کانونی برای هر مطلب
    • قابلیت کانفیک و راه اندازی قدم به قدم
    • امکان ریدایرکت کردن آدرس سایت
    • راهنمای هر بخش بصورت قدم به قدم
    • تجزیه و تحلیل زنده مطالب
    • و بسیاری از امکانات مجزا و هوشمند در نسخه پریمیوم
    • پشتیبانی کامل از زبان فارسی
    • و …

 

یکی دیگر از بهترین قابلیت های این افزونه مدیریت ریدایرکت ها می باشد.این قابلیت به شما کمک می کند تا سلامت سایتتان را حفظ کنید و سایت خود را بروز نگه دارید.

چه موقع از مدیریت ریدایرکت استفاده می کنیم؟

زمانی که شما یک صفحه یا یک مطلب از سایتتان را حذف می کنید. ریسک زیادی انجام داده اید! خطاهای وبمستر تولز چه بر سر وبسایت شما می آورند. گوگل به شدت مخالف است با سایتی که خطای ۴۰۴ زیادی دارد.

قابلیت قرار دادن چند کلمه کانونی برای هر صفحه:
کلمه کانونی یکی از قابلیت های مهم وردپرس سئو هست. شما می توانید برای هر صفحه از سایتتان ، یک کلمه کانونی تعریف کنید و مطلب را بر اساس این کلمه سئو(seo) کنید. متاسفانه نسخه رایگان این افزونه فقط از یک کلمه کانونی پشتیبانی می کند اما در نسخه پرمیوم می توانید بصورت همزمان چندین کلمه کانونی برای سایتتان انتخاب کنید. و بسیاری از قابلیت های دیگر …

Yoast Premium

 

ادامه‌ی پست

سوال :: توزیع های مختلف لینوکس

با سلام.

دوستان برای کسی که میخواد تازه با لینوکس کار کنه کدام توزیع لینوکس مناسب است؟

آیا اوبونتو خوبه با دبیان یا رد هت؟ فرق توزیع های مختلف لینوکس با یکدیگر چیه؟چه فرق اساسی دارن یا فرقاشون کم هست؟

دوستان لطفا یه توضیح کاملی درمورد توزیع های مختلف لینوکس بدید من بفهمم چی به چی هست

ممنون

ادامه‌ی پست

مجله آموزشی متحد | یافت و تعیین توالی در ژنتیک DNA | تعیین توالی DNA | تهیه الگو توالی

یافت و تعیین توالی در ژنتیک DNA


تاریخ ارسال : ۳۰ / بهمن / ۱۳۹۶   بازدید : ۱۰۹   نویسنده : سید محمد ملیحی


تعیین توالی DNA | یافت توالی در ژنتیک | تهیه الگو توالی | یافت و تعیین توالی در ژنتیک DNA

خب دوستان و علاقه مندان به علم وسیع و گسترده ژنتیک ( تعیین توالی DNA | تهیه الگو توالی ) در خدمت شما هستم با یافت و تعیین توالی در ژنتیک DNA (تعیین توالی DNA)، تهیه الگو توالی ژنتیک ، یافت آن و وِیژگی های آن ، زمان مطالعه این مطلب فقط ۵ دقیقه می باشد.

  • ✔️توالی یابی DNA (به انگلیسی DNA Sequencing) یا همان تعیین توالی DNA فرایندی برای تعیین دقیق ترتیب نوکلئوتیدهای درون مولکول DNA می‌باشد. توالی یابی شامل هر روش یا فناوری ای است که ترتیب چهار باز آدنین، گوانین، سیتوزین و تیمین را در یک رشته از DNA تعیین می‌کند. ظهور روش‌های توالی یابی سریع DNA تا حد زیادی به تحقیقات و اکتشافات در زیست‌شناسی و پزشکی کمک کرده‌است. دانش توالی یابی DNA برای تحقیقات زیست‌شناسی پایه، به یک ضرورت تبدیل شده‌ است و در زمینه‌های کاربردی متعددی مانند تشخیص پزشکی، بیوتکنولوژی، پزشکی قانونی، ویروس‌شناسی و زیست‌شناسی سیستماتیک استفاده می‌شود. سرعت بالای توالی یابی که از طریق تکنولوژی‌های مدرن بدست آمده‌است برای توالی یابی کامل DNA یا ژنوم گونه‌های مختلف جانوران همچون ژنوم انسان، بسیاری از حیوانات، گیاهان، و گونه‌های میکروبی مورد استفاده قرار گرفته‌است. در اوایل دههٔ ۱۹۷۰ توالی یابی DNA برای اولین بار توسط محققان دانشگاهی با استفاده از روش دشوارکروماتوگرافی دو بعدی به دست آمد. به دنبال توسعهٔ روش‌های مبتنی بر فلوئورسانس روش‌هایی ابداع گردیده که در آنها از یک توالی یاب دی ان ای استفاده می‌شود، به کمک این توالی یاب‌ها، توالی یابی DNA آسان‌ تر و سریع تر شده‌است.
  • ✔️جهت مطالعه بیشتر تعیین توالی چیست کلیک کنید

یکی از روش هایی که در تاریخ علم تعیین توالی ژنوم کامل موجودات بسیار مهم  شده است روش تعیین توالی( یافت توالی در ژنتیک ) شکاری (Shotgun sequencing) است که در اوایل کشف تعیین توالی از آن استفاده می‌شد در این روش DNA ای که قرار است توالی آن مشخص شود به طور تصادفی شکسته می‌شود و آنگاه قطعات حاصل در یک پلاسمید یا حامل M13 کلون می‌شوند.

پیمایش با پرایمر (Primer walking) یکی دیگر از روش های برای تهیه الگو( تهیه الگو توالی ) در آزمایشات تعیین توالی است. در این روش ابتدا یک پرایمر الیگونوکلئوتیدی که مکمل بخش انتهایی ناحیه شناخته شده یک توالی DNA است طراحی می‌گردد و سپس با جفت کردن این پرایمر نشاندار با بخش مکمل آن، دنباله آن که در واقع بخش مکمل با ناحیه ناشناخته است سنتز می‌گردد در حقیقت به این صورت کپی‌های تک رشته‌ای از ناحیه ناشناخته تهیه می‌شود که می‌توان در آزمایشات تعیین توالی از آنها استفاده کرد.

سپس از محل اتصال این قطعات به DNA ای حامل همانند سازی در یک یا هر دو جهت آغاز می‌شود. فرایند تکثیر تا زمانی که مقدار DNA ای تولید شده به ۱۰ـ۵ برابر DNA الگوی اولیه برسد ادامه خواهد داشت و بعداً با استفاده از کامپیوتر هم پوشانی توالی های مختلف در این مجموعه DNA خوانده می‌شود و از این اطلاعات می‌توان برای تعیین توالی مولکول DNA اولیه استفاده کرد. هرچه تعداد این هم پوشانی‌ها که دارای نقاط شروع و پایان متفاوتی هستند و در جهت های مختلفی نیز خوانده می‌شوند بیشتر باشد به همان میزان اطمینان از صحت توالی تعیین شده نیز بسیار بالاتر می‌رود.

با تعیین توالی DNA هر ۲ رشته مولکول به طور مجزا و با تائید مکمل بودن آنها می توان خطاهای تولید شده در زمان آزمایش یا در طی مرحله الکتروفورز را تشخیص داده و حذف کرد. امروزه روش های خودکار تعیین توالی تغییری اساسی در سرعت و جهت گیری پرو‍ژه‌های ژنومی ایجاد کرده است. از طریق این روش ها تا زمان نگارش کتاب توالی کامل ژنوم بسیاری از باکتریها چون مخمر Saccharomces cerevisiae و Caenorhabditis تعیین شده است و پروژه ژنوم انسانی نیز رو به کامل شدن است.

تهیه الگو برای آزمایشات تعیین توالی(یافت و تعیین توالی در ژنتیک DNA)

در روش خاتمه زنجیره برای تعیین توالی DNA باید از DNA تک رشته‌ ای استفاده شود تا پرایمر امکان یابد بدون هیچ ممانعتی به الگوی خود دسترسی داشته باشد. یکی از روش های تهیه DNA تک رشته‌ای تزریق فرم دو رشته‌ای آن به یک ویروس باکتریایی است که این ویروس به طور طبیعی تنها یکی از دو رشته را به میزبان باکتریایی خود وارد می‌کند.

روش دیگر واسرشت کردن DNA دو رشته‌ای توسط محلولهای قلیایی است که در این صورت باید قبل از دوباره چسبیدن رشته‌ها به یکدیگر پرایمر را به آنها افزود با این روش تجزیه و تحلیل DNAهای دو رشته‌های نیز امکان پذیر می‌باشد و امروزه بیشتر از این روش استفاده می‌شود.

یافت و تعیین توالی در ژنتیک DNA

بیشتر بخوانید: پیونده گمشده حیات زمین…

توالی یابی پایان دهی زنجیره

واکنش‌های سنتز رشته آسانترین بخش از روش توالی یابی DNA می‌باشند. اگرچه تعدادی از معرف های (Reagents) مختلف باید با همدیگر مخلوط شوند، ولی این مرحله نسبت به مرحله هضم برشی پیچیده‌تر نمی‌باشد. بطور کلی در همه روش های بیولوژی مولکولی، اگر از معرف های با کیفیت خوب استفاده گردد و پیپت نمودن (Pipetting) به دقت انجام شود، تقریباً آزمایش همیشه موفقیت آمیز خواهد شد. واکنش‌های توالی‌یابی DNA با در دسترس بودن کیت‌های تجارتی توالی یابی، آسانتر انجام می‌شوند. این کیت‌ها محتوی معرفهای پیش مخلوط (Premixed) بوده و دستورالعمل‌های دقیقی در خصوص چگونگی استفاده از آنها را نیز دارا می‌باشند و به مهارت‌های خاصی نیز نیاز ندارند، چون در بیشتر کیت‌ها، معرف ها  دارای کدهای رنگی می‌باشند؛ اما کیت‌های مورد استفاده باید قابل اطمینان باشند. اگر شما نفهمید لوله آبی چه کاری انجام می‌دهد یا این که حمام آبی ۳۷ درجه سانتی گراد به مدت ۵ دقیقه باعت چه عملی می‌شود، نمی‌توانید اشتباهات احتمالی را رفع کنید و تحقیق به بن بست می‌رسد. در ادامه به ، هریک از معرف هایی که در واکنش‌های سنتز رشته استفاده می‌شوند؛ بررسی می شوند:

  • ۱ـ اجزای تشکیل دهنده واکنش های سنتز رشته
    • نخستین مرحله اتصال یا چسباندن یک پرایمر الیگونوکلئوتیدی کوتاه به هر یک از مولکول های الگوتک رشته‌ای می‌باشد. پرایمر به عنوان نقطه شروع یک زنجیره پلی نوکلئوتیدی جدید که مکمل رشته الگو است؛ عمل می‌کند.
    • سنتز رشته توسط آنزیم DNA پلی مراز انجام می‌شود و به دی اکسی نوکلئوتید تری فسفات‌ها به عنوان سوبسترا نیاز دارد. معمولاً یک یا چند تا از این DNTPS (Deoxynucleotide triphosphates) با یک نشانگر رادیواکتیو(Redioactive marke) برچسب دار می‌شوند تا بعداً الکتروفورز ژل و اتورادیوگرافی قابل رؤیت باشند.
    • هنگامی که نوکلئوتید پایاندهی زنجیره در مخلوط واکنش قرار گیرد؛ سنتز رشته متوقف می‌شود و بدین ترتیب امکان ایجاد چهار خانواده از مولکول های پایان دهی زنجیر وجود خواهد داشت. به طوری که یک خانواده شامل پلی نوکلئوتیدهایی است که به A ختم می‌شوند؛ خانواده دوم به C ختم می‌گردند و الی آخر.

    ۲ـ پرایمر

    • DNA پلی مراز وابسته به الگو قادر به شروع سنتز DNA در یک مولکول DNA تک رشته‌ای، بدون وجود پرایمر نخواهد بود. در حقیقت یک ناحیه دو رشته‌ای کوتاه مورد نیاز است تا انتهای ۳ را فراهم نموده تا پلی مراز بتواند نوکلئوتیدهای جدید را اضافه کند.

    استفاده از پرایمر موارد ذیل را تأمین می‌کند:

    • همه رشته‌های سنتز شده به وسیله DNA پلی مراز یک انتها خواهند داشت.
    • تنها بخش مورد نظر از مولکول الگو توالی یابی می‌گردد.

    ۳ـ DNA پلی‌مراز

    • هر آنزیمی که DNA را سنتز کند DNA پلی مراز نامیده می‌شود. بیشتر DNA پلی مرازها وابسته به الگو (Template – dependent ) هستند. این بدان معنی است که رشته DNA جدید از روی الگو تک رشته‌ای موجود سنتز می‌شود و توالی رشته جدید مکمل توالی الگو است.
    • تمامی موجودات زنده دارای DNAهای پلی مراز می‌باشند. این آنزیم‌ها نقش اساسی را در همانند سازی و تعمیر مولکول هایDNA سلول بازی می‌کنند. به علاوه بسیاری از باکتریوفاژها و ویروس‌ها دارای ژنهایی هستند که این ژنها بعد از آلودگی، باعث سنتز DNA پلی مرازهای جدیدی می‌گردند.

    ۴ـ قدرت عمل

    • هیچ DNA پلی مرازی بطور نامحدود قادر به سنتز DNA نمی‌باشد،به طوری که پایاندهی زنجیره در نقاطی که آنزیم از الگو جدا می‌شود اتفاق می‌افتد یک آنزیم باقدرت عمل پایین برای توالی یابی DNA مناسب نمی‌باشد

    ۵ـ فعالیت‌های اگزونوکلئازی

    • بسیاری از DNA پلی مرازها آنزیم‌های دوکاره (Dual function) هستند، یعنی از یک طرف قادر به سنتز و از طرف دیگر قادر به حذف نوکلئوتیدها از زنجیره می‌باشند. این حالت ممکن است منحصر به فرد به نظر برسد، اما با وظایفی که این آنزیم‌ها در سلول ایفا می‌کنند مطابقت دارد.

    ۶ـ خصوصیات دیگر پلی مراز ایده‌ال برای توالی یابی DNA

    • ۱ـ در دمای ۵۵ درجه سانتی گراد و بالاتر از آن فعالیت نماید
    • ۲ـ توانایی استفاده از نوکلئوتیدهای تغییر شکل یافته به عنوان سوبستراها
    • ۳ـ سرعت سنتز رشته

    ۷ـ DNA پلی مرازهای مورد استفاده در توالی یابی DNA

    • DNA پلی مراز ایده آل برای توالی یابی پایاندهی زنجیره باید قدرت عمل بالایی داشته باشد، فعالیت اگزونوکلئازی آن کم باشد، در درجه حرارت‌های بالا فعال باقی بماند، قادر به استفاده از نوکلئوتیدهای تغییر شکل یافته به عنوان سوبسترا باشد و سرعت طویل شدن آن حداقل چند صد نوکلئوتید در هر ثانیه باشد.

    ۸ـ دی اکسی نوکلئوتید تری فسفات‌ها

    • در یک آزمایش توالی یابی پایاندهی زنجیره هر یک از چهار dNTPsاستاندارد (dTTP و dGTP و dCTP و dATP) در مخلوط‌های واکنش وجود دارند

    ۹ـ نوکلئوتید برچسب دار شده (Labelled nucleotide )

    • بعد از اینکه رشته‌های پایاندهی زنجیره در ژل توالی یابی ران شدند نیاز است که باندها قابل مشاهده گردند. معمولاً در استفاده از ژل آگارز از اتیدیوم بروماید (Ethidium bromide) برای رنگ آمیزی استفاده می‌شود تا باندها در زیر اشعه ماوراء بنفش قابل مشاهده باشند. اتیدیوم بروماید به DNA در ژل می‌چسبد و سپس در پاسخ به اشعه ماوراء بنفش متشعشع می‌گردد و مکان باندها آشکار می‌گردد.

    ۱۰ـ نوکلئوتید پایان دهی زنجیره

    • معرفی دی دزوکسی نوکلئوتیدها (ddNTPs) یکی از ابداع های کلیدی بود که توالی پایاندهی زنجیره را بسیار موثر نمود (۱۹۷۷Sanger et al ) یک ddNTP فاقد گرون هیدروکسیل (Hydroxyl group) متصل به کربن ۳ پرین در تشکیل پیوند فسفودی استر (Posphodiester) شرکت می‌کند

 

DNA تهیه الگو توالی ژنتیک

 واکنش های توالی یابی(تعیین توالی DNA)

شما DNA الگو را تهیه کرده‌اید و اجزاء واکنش توالی یابی را فراهم نموده‌اید. اکنون باید آنها را با هم مخلوط نمائید تا رشته‌های DNA پایان دهی زنجیره ساخته شوند.

باتشکر از نگاه گرمتان.

برخی ار منابع:

 

ادامه‌ی پست

سوال :: ارتباط دو دیتا بیس

سلام خدمت عزیزان..من میخواستم یه برنامه تحت وب بنویسم ویه برنامه تحت دسکتاپ… زمانی که اینترنت به هردلیلی قطع شد

برنامه تحت دسکتاپ که (پایگاه داد ش روی سیستم نصب است بصورت خودکار بیاد بالا)این تا اینجا..

سوال اینه وقتی تحت دسکتاپ پایگاه ش یسری اطلاعات رو از طریق نرم افزار تحت دسکتاپ پر کرد..وقتی اینترنت وصل شد چجوری بیاد اطلاعات رو بصورت خودکار ارسال کنه به پایگاه داده تحت وب ..یجورای اپدیت میشه..ممنون میشم اگه این روش اموزش چیزی داره یا داخل نت چجوری سرچ کنم تا به نتیجه ای برسم ممنون

ادامه‌ی پست